单细胞免疫组库揭示肿瘤免疫疗法副作用的分
抗CTLA-4和抗PD-1免疫疗法对肿瘤的抑制作用是多层面的，同时也会产生一定的副作用，例如结肠炎等，其分子机制了解尚少。通过单细胞测序和单细胞免疫组库测序分析显示，决定肿瘤免疫副作用的并不是Treg细胞，而是杀伤性T细胞和增殖性T细胞。通过对这些细胞的基因表达等深入分析，筛选潜在的用于免疫治疗副作用的治疗靶点。
1、课题思路
2、免疫治疗引起的结肠炎的免疫细胞分析
选取6例免疫治疗引起结肠炎（case组），5例经免疫治疗无结肠炎（无肠炎对照组）以及5例正常人（正常对照组）的肠道组织制备单细胞悬液，经CD45+分选，获得了个细胞。对这些细胞的分群结果显示，case组的杀伤性T细胞和增殖性T细胞的细胞数目大大增加。
3、case组的杀伤性CD8T细胞和增殖性CD8T增多
随后针对8例case组，6例无肠炎对照组，8例正常对照组的肠道组织制备单细胞悬液，经CD3+分选后进行单细胞5’转录组测序和单细胞TCR测序。结果显示对照组的CD4细胞和CD8细胞的数目均增加。
对CD8T细胞的细分群可将其分成8个细胞亚群，其中cytotoxiceffector细胞和cyclingT细胞是case组特有的，此外，centralmemory/naveT细胞和terminaleffectorT细胞是case组的细胞数目大于两组control组，杀伤性效应分子GZMB的表达在上述三类细胞里也是case组大于两组control组。这些细胞亚群，可能参与了免疫治疗引发的结肠炎。相对应地，tissue-residentmemoryT细胞在case组的数目小于两组control组。以上结果经流式和多色免疫荧光验证获得了一致的结果。
4、case组的效应性细胞和调节性细胞增多
对CD4T细胞的细分群可将其分成10个细胞亚群，其中Th1effector细胞和cyclingT细胞是case特有的，tissue-residentmemoryT细胞是case数目更少的。
在动物模型中的研究显示抗CTLA-4治疗减少了Treg的细胞数目，因此，Treg的数目减少可能是引起副作用的一个原因。针对Treg的细胞数目统计发现，case组的Treg细胞数目比两组control略高，并且FOXP3的表达量也是在case组略高，以上结果经流式验证获得了一致的结果。说明免疫治疗引起的结肠炎并不是由Treg细胞数目减少引起的。
5、结肠炎相关的T细胞和组织驻留T细胞的TCR克隆型相同
筛选到与结肠炎相关的T细胞后，首先
